硕士论文-热应激小鼠囊胚孵出率及其热休克蛋白70表达的研究，共57页，30320字
摘 要
以昆明雌性小白鼠为受试动物，将体外培养至扩张囊胚（hCG 后 113h）的小鼠胚
胎分别施以 38℃温和热应激和 40℃强烈热应激处理 1h，2h 和 3h，然后在 37℃正常培
养条件下分别恢复 3h，2h 和 1h，用体视显微镜观察 hCG 后 161h 的囊胚孵出率以及经
38℃和 40℃诱导热应激后囊胚的孵出率，用 Western blot 技术检测小鼠囊胚 HSP70 及
HSP72 的表达，以研究小鼠囊胚的热敏性、热应激对小鼠囊胚 HSP70 及 HSP72 表达的
影响以及囊胚热耐受的获得与 HSP72 表达之间的关系。试验结果如下：
1.热应激对囊胚孵出率的影响
热应激组囊胚孵出率均低于对照组，40℃热应激处理不同时间各组囊胚孵出率（分
别为 58.53%，47.85%和 45.28%）均低于 38℃热应激处理的各相应组（分别为 62.98%，
57.35%和 51.27%）。热应激处理 2h 和 3h 时，40℃热应激组的囊胚孵出率（分别为 47.85%
和 45.28%）显著（P<0.05）低于 38℃热应激组（57.35%和 51.27%）；热应激处理 1h 时，
囊胚孵出率在 38℃和 40℃组间无显著差异（P>0.05）。
在 38℃和 40℃热应激组，囊胚孵出率均随着热应激时间的延长而降低。38℃组内
热应激处理 1h，2h 和 3h 囊胚孵出率分别为 62.98%，57.35%和 51.27%，三组之间差异
显著（P<0.05）；40℃热应激处理 1h 囊胚孵出率（58.53%）显著（P<0.05）高于热应激
处理 2h（47.85%）和 3h（45.28%）；囊胚孵出率在 40℃热应激处理 2h（47.85%）和 3h
（45.28%）之间无显著差异（P>0.05）。
2.诱导热应激对囊胚孵出率的影响
先经 38℃热诱导 1h，2h 和 3h，再经 40℃强烈热应激处理 2h 后囊胚的孵出率
（49.18%，54.74%和 53.36%）均高于 40℃强烈热应激处理 2h 组（47.85%）。其中 38℃
热诱导 2h 囊胚孵出率最高（54.74%），与 40℃强烈热应激处理 2h 组（47.85%）相比差
异显著（P<0.05）。
3.热应激对囊胚 HSP70 表达的影响
38℃热应激组内，囊胚 HSP70 表达量随热应激时间的延长呈增加趋势。38℃热应
激处理 3h 囊胚 HSP70 表达量（1.11）显著（P<0.05）高于对照组（0.94）；38℃热应激
处理 1h 和 2h 囊胚 HSP70 表达量（0.96 和 0.97）与对照组（0.94）相比无显著差异（P>0.05）。
40℃热应激组囊胚 HSP70 表达量随热应激时间的延长先减少后增加。40℃热应激
处理 1h 和 3h 囊胚 HSP70 表达量（1.17 和 1.13）均显著（P<0.05）高于对照组 0.97 的
表达量；40℃热应激处理 2h 囊胚 HSP70 表达量（0.92）与对照组（0.97）相比无显著
差异（P>0.05）。
4.热应激对囊胚 HSP72 表达的影响
对照组和 38℃、40℃热应激组的囊胚均有 HSP72 的表达。其中，38℃热应激处理
2h 囊胚 HSP72 表达量（0.85）显著（P<0.05）高于对照组（0.66）；38℃热应激处理 1h
和 3h 囊胚 HSP72 表达量（0.72 和 0.78）均高于对照组（0.66），但与对照相比无显著差
异（P>0.05）。
40℃热应激组囊胚表达量随热应激时间的延长呈增加趋势。热诱导组囊胚孵出率与
38℃热应激组囊胚 HSP72 的表达量呈正相关。
关键词：小鼠；囊胚；热应激；HSP72；HSP70
目 录
中文摘要…………………...….…….....1
英文摘要…………………….……….3
缩略词对照…………………….……….5
文献综述….1
1 前言…...1
1.1 早期胚胎发育与胚胎基因组的表达…………...1
1.1.1 早期胚胎发育……………1
1.1.2 胚胎基因组的表达……...2
1.2 热应激与热休克蛋白 70….3
1.2.1 热应激与热休克反应…...3
1.2.2 热休克蛋白的分类……...4
1.2.3 热休克蛋白 70 的分类….4
1.2.4 热休克蛋白 70 的生物学特性…………….…5
1.2.5 热休克蛋白 70 表达的基因调控………….…5
1.2.6 热休克蛋白 70 的生物学功能…….…………7
1.2.6.1 提高细胞耐热性和细胞保护…….………...7
1.2.6.2 分子伴侣功能.………...7
1.2.6.3 抗细胞凋亡功能.……...8
1.2.6.4 抗细胞氧化功能….…...9
1.3 热休克蛋白 70 与早期胚胎发育………….…...9
1.3.1 体内发育胚胎中热休克蛋白 70 的表达.……9
1.3.2 体外培养胚胎中热休克蛋白 70 的表达……10
材料与方法………………..11
2.1 试验材料………………….11
2.1.1 试验动物………………...11
2.1.2 试剂...11
2.1.3 仪器设备………….……..11
2.2 试验方法………………….12
2.2.1 试验方案的总体设计…..12
2.2.1.1 胚胎的发育时期的确定……………....…...12
2.2.1.2 胚胎分组与体外热应激处理…………...…12
2.2.1.3 热应激对囊胚孵出率的影响……………...………….……...…12
2.2.1.4 诱导热应激对囊胚孵出率的影响..……………….……………12
2.2.1.5 热应激对囊胚热休克蛋白 70 表达的影响………………….…13
2.2.2 小鼠超排处理…………..13
2.2.3 CZB 培养液的配制………………....………..13
2.2.4 胚胎采集………………..13
2.2.5 胚胎体外培养及质量鉴定………………......13
2.2.6 电泳..14
2.2.6.1 蛋白质样品制备……...14
2.2.6.2 SDS-PAGE 凝胶电泳……..………………..14
2.2.6.3 凝胶非铵盐银染法…...14
2.2.7 Western blot…………..…15
3结果…..17
3.1 热应激前后囊胚的发育形态……………….....17
3.2 热应激对囊胚孵出率的影响………………….18
3.3 诱导热应激对囊胚孵出率的影响…………….19
3.4 热应激囊胚 SDS-PAGE 电泳结果…………....20
3.5 热应激囊胚 HSP70 的表达…….………….…..21
3.6 热应激囊胚 HSP72 的表达………………..…..23
4讨论……………….……….26
4.1 热应激对囊胚孵出率的影响………….………26
4.2 诱导热应激对囊胚孵出率的影响…………….27
4.3 热应激对囊胚热休克蛋白 70 表达的影响……………….………..27
4.3.1 热应激对囊胚 HSP70 表达的影响………....……………….……27
4.3.2 热应激对囊胚 HSP72 表达的影响….………28
结论…..30
致谢…..31
参考文献....32
附录………………….....….37
攻读硕士学位期间发表的学术论文………………42

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论文专业：临床兽医学
论文编号：198454
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