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硕士论文 复合螺旋藻多糖抗辐射抑肿瘤药理作用研究

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硕士论文-复合螺旋藻多糖抗辐射抑肿瘤药理作用研究,共75页,41934字
摘 要
本试验以海水钝顶螺旋藻和银杏叶有效成分为材料,对螺旋藻多糖的提取、银杏叶
提取物中银杏黄酮与银杏内酯的分离进行了研究,并将螺旋藻多糖与银杏叶有效成分复
合,观察此复合制剂抑肿瘤、抗辐射的药理作用。获得如下研究结果:
1、螺旋藻多糖的提取
采用石油醚脱脂,超声波处理提取螺旋藻多糖,并用三氯乙酸沉淀蛋白质,探讨了
浸提时间、浸提温度及浸提液 pH 对螺旋藻多糖提取的影响,得出了最佳提取工艺。其
中最佳浸提时间为 4h,最佳浸提温度为 80℃,浸提液最佳 pH 为 10。所得到的螺旋藻
多糖含量在 93%以上,蛋白质含量为 5.96%。
2、银杏叶提取物中银杏黄酮与银杏内酯的分离
将银杏叶提取物溶于 pH 为 14 的碱性溶液中,再将 10%HCl 逐滴加入溶液中,逐
步酸化。当溶液 pH 为 6 时银杏叶提取物中的银杏内酯完全析出。分别冷冻干燥沉淀与
溶液,可分别得银杏内酯与银杏黄酮。
3、中、低剂量复合螺旋藻多糖对小鼠 S180 肉瘤的抑制作用
中剂量(100mg·kg-1·d-1)螺旋藻多糖与银杏叶有效成分(总黄酮含量≥24%、银杏
内酯含量≥6%)按 1:1、2:1 和 1:2 的比例复合分别灌服小鼠,观察对小鼠 S180 肉瘤的抑
制作用。螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 1:1 比例复合组、2:1 比例复合组和 1:2 比例复合
组的抑瘤率分别比空白对照组提高 39.436%(P<0.05)、25.121%(P<0.05)和 36.680
%(P<0.05)。与空白对照组相比,试验组小鼠的脾指数、胸腺指数和外周白细胞数都
无显著差异(P>0.05)。中剂量螺旋藻多糖与银杏叶有效成分复合使用,对抑制小鼠 S180
肉瘤能产生协同增效作用,且对小鼠未见免疫损伤。
低剂量(50 mg·kg-1·d-1)螺旋藻多糖与银杏叶有效成分(总黄酮含量≥24%、银杏内
酯含量≥6%)按 1:1、2:1 和 1:2 的比例复合,分别灌服小鼠,观察对小鼠 S180 肉瘤的抑
制作用。螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 1:1 比例复合组、2:1 比例复合组和 1:2 比例复合
组的抑瘤率分别比空白对照组提高 62.281%(P<0.01)、6.406%(P>0.05)和 42.709
%(P<0.05)。与空白对照组相比,所有试验组小鼠的脾指数、胸腺指数和外周白细胞
数都无显著差异(P>0.05)。
4、复合螺旋藻多糖对人结肠癌 HT29 细胞的抑制作用
螺旋藻多糖与银杏叶有效成分(总黄酮含量≥24%、银杏内酯含量≥6%)1:1 比例复
合组、1:2 比例复合组和 2:1 比例复合组对人结肠癌 HT29 细胞的抑瘤率,高剂量时分别
比空白对照组提高 68.04%(P<0.01)、59.88%(P<0.01)和 58.82%(P<0.01);中剂
量时分别比空白组提高 47.52 %(P<0.01)、51.98%(P<0.01)和 40.31%(P<0.01);
低剂量时分别比空白对照组提高 39.70 %(P<0.01)、29.88%(P<0.01)和 27.31%(P
<0.01)。各复合制剂组的抑瘤率都高于相对应剂量的单一成分组,螺旋藻多糖与银杏叶
有效成分联合使用对抑制 HT29 细胞能产生协同增效作用。
5、复合螺旋藻多糖对人白血病 HL60 细胞的抑制作用
螺旋藻多糖与银杏叶有效成分(总黄酮含量≥24%、银杏内酯含量≥6%)1:1 比例复
合组、1:2 比例复合组和 2:1 比例复合组对人白血病 HL60 细胞的抑瘤率,高剂量时分别
比空白对照组提高 62.30%(P<0.01)、56.65%(P<0.01)和 58.59%(P<0.01);中剂
量时分别比空白组提高 52.16%(P<0.01)、49.14%(P<0.01)和 45.92%(P<0.01);
低剂量时分别比空白对照组提高 44.62%(P<0.01)、40.03(P<0.01)和 33.55%(P<
0.01)。各复合制剂组的抑瘤率都高于相对应剂量的单一成分组,螺旋藻多糖与银杏叶有
效成分联合使用对抑制 HL60 细胞能产生协同增效作用。
6、复合螺旋藻多糖抗辐射作用
高剂量(200 mg·kg-1·d-1)螺旋藻多糖与银杏叶有效成分(总黄酮含量≥24%、银杏
内酯含量≥6%)按 1:1、2:1 和 1:2 的比例复合。分别给昆明种小鼠灌服此三种复合制剂
及螺旋藻多糖、银杏黄酮、银杏内酯三种单一成分。连续灌服 14 天后,用 60Co γ-射线
全身照射,照射后继续灌服 16 天。与空白组相比,螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 1:1
比例复合组、2:1 比例复合组、1:2 比例复合组、螺旋藻多糖组、银杏黄酮组和银杏内酯
组平均存活天数分别提高了 4.0(P<0.01)、3.7(P<0.01)、3.3(P<0.01)、2.3(P<0.05)、
2.5(P<0.01)、2.6(P<0.01);存活率分别提高 80%、60%、40%、20%、30%、20
%。
中剂量(100 mg·kg-1·d-1)和低剂量(50 mg·kg-1·d-1)螺旋藻多糖与银杏叶有效成分
(总黄酮含量≥24%、银杏内酯含量≥6%)按 1:1、2:1 和 1:2 的比例复合。分别给昆明
种小鼠灌服此复合制剂及螺旋藻多糖、银杏黄酮、银杏内酯三种单一成分。连续灌服 14
天后,用 60Co γ-射线全身照射,照射后继续灌服 16 天。与对照组相比,中、低螺旋藻
多糖组、银杏黄酮组和银杏内酯组平均存活天数分别提高了 2.8(P<0.01)、2.2(P<0.01)、
3.0(P<0.01)、2.5(P<0.01)、0.5(P<0.05)、2.6(P<0.01),存活率分别提高 30%、
10%、40%、20%、10%、20%。
与对照组相比,中、低剂量螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 1:1 比例复合组、2:1 比
例复合组、1:2 比例复合组、平均存活天数分别提高了 3.7(P<0.01)、3.8(P<0.01)、
2.6(P<0.01)、3.6(P<0.01)、2.4(P<0.01)、3.6(P<0.01),存活率分别提高 60%、
70%、20%、50%、30%、60%。
关键词:螺旋藻多糖
银杏叶有效成分
S180 肉瘤
HT29 细胞
HL60 细胞
60
Co
γ-射线
目 录
摘要 ......... 1
Abstract .. 4
英文缩写词表 ........ 7
第一章 文献综述 8
1 螺旋藻多糖的研究现状 .... 8
1.1 螺旋藻多糖的提取及结构 ............ 8
1.1.1 粗提 8
1.1.2 纯化 9
1.1.3 螺旋藻多糖的结构 ...... 9
1.2 螺旋藻多糖药理作用的研究 ...... 10
1.2.1 增强机体免疫功能 .... 10
1.2.2 抗肿瘤作用 . 10
1.2.3 抗辐射作用 . 11
1.2.4 抗氧化、抗衰老作用 11
1.2.5 降血糖血脂作用 ........ 11
1.2.6 抗病毒 ......... 12
1.2.7 其它药理作用 ............ 12
2 银杏黄酮内酯的研究现状 ............. 12
2.1 银杏黄酮内酯的提取 ... 12
2.1.1 水蒸气蒸馏法 ............ 12
2.1.2 有机溶剂萃取法 ........ 12
2.1.3 超临界流体萃取 ........ 13
2.1.4 树脂法 ......... 13
2.1.5 其它方法 ..... 14
2.2 银杏黄酮内酯药理学研究 .......... 14
2.2.1 对心脑血管系统及外周循环的作用 ...... 14
2.2.2 抗 PAF 作用 .............. 14
2.2.3 抗氧化抗自由基作用 14
2.2.4 对神经系统的作用 .... 15
2.2.5 其它药理作用 ............ 15
第二章 海水钝顶螺旋藻多糖提取工艺的研究 .......... 16
1 材料与方法 ....... 16
1.1 试验材料 ........ 16
1.1.1 材料 ............. 16
1.1.2 药品与试剂 . 16
1.1.3 主要仪器 ..... 16
1.2 试验方法 ........ 16
1.2.1 超声波处理条件 ........ 16
1.2.2 螺旋藻多糖的提取方法 ........... 17
1.2.3 总多糖含量测定 ........ 17
1.2.4 蛋白含量测定 ............ 17
2 结果与讨论 ....... 18
2.1 多糖标准曲线 18
2.2 蛋白浓度标准曲线 ....... 18
2.3 石油醚脱脂多螺旋藻多糖提取的影响 ..... 19
2.4 超声波处理对螺旋藻多糖提取的影响 ..... 19
2.5 浸提液 pH 值对螺旋藻多糖提取的影响 . 20
2.6 浸提时间对螺旋藻多糖提取的影响 ......... 21
2.7 浸提温度对螺旋藻多糖提取的影响 ......... 21
3 小结 ... 22
第三章
银杏叶有效成分中银杏黄酮与银杏内酯的分离 ......... 24
1 材料 ... 24
1.1 银杏叶有效成分 ........... 24
1.2 主要试剂及配制 ........... 24
2 方法 ... 24
2.1 银杏黄酮与银杏内酯的分离方法 ............. 24
2.2 总黄酮含量的测定 ....... 24
2.2.1 黄酮含量标准曲线绘制 ........... 24
2.2.2 样品黄酮含量测定 .... 25
2.3 内酯含量测定 25
2.3.1 内酯含量标准曲线绘制 ........... 25
2.3.2 样品内酯含量测定 .... 25
3 结果 ... 25
3.1 黄酮含量标准曲线 ....... 25
3.2 内酯含量标准曲线 ....... 25
3.3 银杏黄酮与银杏内酯分离结果 .. 26
4 讨论 ... 28
5 小结 ... 28
第四章
复合螺旋藻多糖抗肿瘤作用研究 ... 29
1 中、低剂量复合螺旋藻多糖对小鼠 S180 肉瘤的抑制作用 ...... 29
1.1 材料 . 29
1.1.1 螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 .............. 29
1.1.2 环磷酰胺 ..... 29
1.1.3 动物及肿瘤细胞 ........ 29
1.1.4 主要仪器 ..... 29
1.1.5 灌服药品配制 ............ 29
1.2 试验方法 ........ 30
1.2.1 小鼠饲养管理 ............ 30
1.2.2 试验方法 ..... 31
1.3 数据处理 ........ 31
1.4 结果 . 31
1.5 讨论 . 33
2 复合螺旋藻多糖对人结肠癌 HT29 细胞、人白血病 HL60 细胞的抑制作用 .... 35
2.1 材料 . 35
2.1.1 主要仪器 ..... 35
2.1.2 肿瘤细胞 ..... 36
2.1.3 主要试剂及配制 ........ 36
2.1.4 培养器皿及处理 ........ 36
2.1.5 供试药物的配制 ........ 37
2.2 方法 . 38
2.2.1HT29、HL60 细胞的复苏、培养与传代 ............. 38
2.2.2 试验方法 ..... 38
2.3 试验结果 ........ 38
2.4 讨论 . 41
3 小结 ... 42
第五章
复合螺旋藻多糖辐射保护作用研究. 43
1 材料 ... 43
1.1 螺旋藻多糖与银杏叶有效成分 .. 43
1.2 试验动物 ........ 43
1.3 主要仪器及器械 ........... 43
1.4 灌服药品配制 43
2 试验方法 ........... 45
2.1 小鼠的饲养管理 ........... 45
2.2 方法 . 45
2.3 辐射条件 ........ 45
3 数据处理 ........... 45
4 试验结果 ........... 45
5 讨论 ... 49
6 小结 ... 51
结论与后续工作建议 ......... 52
1 主要结论 ........... 52
1.1 海水钝顶螺旋藻多糖的提取 ...... 52
1.2 银杏有效成分中银杏黄酮与银杏内酯的分离 ........ 52
1.3 中、低剂量复合螺旋藻多糖对小鼠 S180 肉瘤的抑制作用 ... 52
1.4 复合螺旋藻多糖对人结肠癌 HT29 细胞、人白血病 HL60 细胞的抑制作用 . 52
1.5 复合螺旋藻多糖辐射保护作用研究 ......... 52
2 后续工作建议 ... 52
参考文献 ............. 54


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论文格式:word
论文专业:临床兽医学
论文编号:197687
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